Esami laboratorio: Mutazione MDR 1 mediante PCR real-time

Introduzione
La proteina MDR1, nota anche come glicoproteina P (P-gp) è il prodotto del gene mdr1. La P-gp è fondamentale per il trasporto di molti farmaci, tossici e antibiotici, di uso comune anche in medicina veterinaria (Martinez et al., 2008). Diversi anni fa, una mutazione consistente in una delezione di 4 paia di basi a carico del gene mdr1, è stata identificata in cani di razza collie, ed era associata ad un fenotipo sensibile all’ivermectina (Pulliam et al., 1985).

Nei cani con genotipo omozigote per la mutazione MDR1 la funzionalità della P-gp è alterata; ciò comporta un incremento della sensibilità di questi soggetti a farmaci quali: ivermectina, doramectina, moxidectina, milbemicina ossima, vincristina, digossina e loperamide (Barbet et al., 2009), comunemente trasportati da questa proteina. Esistono anche farmaci sospettati di provocare tossicità legata all’alterazione genetica MDR1: ciclosporina, acepromazina e butorfanolo.

Per alcuni di questi farmaci, nei cani con la mutazione per il gene MDR1, la penetrazione a livello encefalico è aumentata, e gli animali vanno incontro a neurotossicosi, anche quando i medicinali siano somministrati ai normali dosaggi terapeutici, come nel caso dell’ivermectina e della doramectina.

Questa mutazione è stata recentemente descritta in sei diversi Paesi, ed osservata anche in cani di razze diverse dal collie: Australian shepherd, Border collie, Shetland sheepdog, English shepherd, German sheperd, White sheperd, Longhaired whippet (Neff et al., 2004; Geyer et al., 2005; Mealey and Meurs 2008).

Negli USA ed in Germania, è stato stabilito che è necessario testare il genotipo MDR1 del cane nelle razze più predisposte, prima di ogni tipo di trattamento con i farmaci sopradescritti (Martinez et al., 2008).

Cosa possiamo offrirvi ?
Da oggi presso il Laboratorio di Analisi Veterinarie San Marco, nell’ambito della sempre crescente offerta di test genetici, è disponibile un rapido test mediante PCR real-time per la determinazione del genotipo MDR1 del cane, con refertazione in solo 2 giorni lavorativi, e con un prezzo scontato rispetto alla metodica con sequenziamento diretto.

Figura 1
Il campione in verde con il picco a temperatura di circa 62.5 °C è un wild type, e non presenta la mutazione, genotipo +/+. I campioni in rosso ed in nero, con due picchi, sono dei campioni con la mutazione per la MDR1 in eterozigosi, genotipo +/-, e avremo un picco wild type ed un picco con la mutazione, con temperatura di 50 °C

Figura 2
Il campione in verde con il picco a temperatura di circa 62.5 °C è un wild type, e non presenta la mutazione, genotipo +/+. Il campione in rosso con un solo picco a temperatura di 50 °C è un mutato in omozigosi, con genotipo -/-.

Bibliografia
1. Martinez, M., Modric, S., Sharkey, M., Troutman, L., Walker, L., Mealey, K., 2008. The pharmacogenomics of P-glycoprotein and its role in veterinary medicine. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics 31, 285–300.
2. Pulliam, J.D., Seward, R.L., Henry, R.T., Steinberg, S.A., 1985. Investigating ivermectin toxicity in Collies. Veterinary Medicine 80, 33–40.
3. Barbet, J.L., Snook, T., Gay, J.M., Mealey, K.L., 2009. ABCB1-1 Delta (MDR1-1 Delta) genotype is associated with adverse reactions in dogs treated with milbemycin oxime for generalised demodicosis. Veterinary Dermatology 20, 111–114.
4. Neff, M.W., Robertson, K.R., Wong, A.K., Safra, N., Broman, K.W., Slatkin, M., Mealey, K.L., Pedersen, N.C., 2004. Breed distribution and history of canine MDR1–1D, a pharmacogenetic mutation that marks the emergence of breeds from the collie lineage. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 101, 11725–11730.
5. Geyer, J., Döring, B., Godoy, J.R., Leidolf, R., Moritz, A., Petzinger, E., 2005b. Frequency of the nt230 (del4) MDR1 mutation in Collies and related dog breeds in Germany. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics 28, 545–551.
6. Mealey, K.L., Meurs, K.M., 2008. Breed distribution of the ABCB1-1Delta (multidrug sensitivity) polymorphism among dogs undergoing ABCB1 genotyping. Journal of the American Veterinary Medical Association 233, 921–924.

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PUBBLICAZIONI

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